檢測原理

Elisa試驗(yan)(yan)是一(yi)種敏感性高，特(te)異性強，重復性好的(de)實(shi)驗(yan)(yan)診斷方法(fa)。由于其試劑穩定、易(yi)保存，操作簡便，結果判(pan)斷較客觀等因素，已廣(guang)泛應(ying)用在免疫學檢(jian)驗(yan)(yan)的(de)各領域中。依次加入標本、標準品(pin)、HRP標記(ji)的檢測抗體(ti)，經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色(se)，TMB在(zai)過氧化(hua)物酶的催化(hua)下(xia)轉(zhuan)化(hua)成(cheng)藍(lan)色(se)，并(bing)在(zai)酸(suan)的作用(yong)下(xia)轉(zhuan)化(hua)成(cheng)*終的黃色(se)。用(yong)酶標儀(yi)在(zai)450nm 波長下測(ce)定吸光度（OD 值(zhi)），計(ji)算樣(yang)品(pin)濃度。

※※※※※※※※※樣(yang)品收集、處理及保(bao)存方法

1）血清－－－－-操作過程中避免任(ren)何(he)細胞刺(ci)激。使用不含熱(re)原和內毒(du)素的試管。收集血(xue)液后(hou)，1000×g離心(xin)10分鐘(zhong)將血(xue)清和紅細胞(bao)迅(xun)速小(xiao)心地分離。

2）血漿－－－－-EDTA、檸檬酸鹽、肝素(su)血漿可用(yong)于檢(jian)測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3）細胞(bao)上(shang)清液－－-1000×g離(li)心10分鐘去除(chu)顆粒和聚合(he)物。

4）組織(zhi)勻(yun)漿－－－－-將組(zu)織加入適量(liang)生理鹽水(shui)搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液

5）保存(cun)－－－－－－如果樣品不立即使用，應將(jiang)其(qi)分(fen)成小部(bu)分(fen)-70 ℃保存，避免反復冷(leng)凍。盡可能的不要(yao)使用溶血(xue)(xue)(xue)(xue)或高血(xue)(xue)(xue)(xue)脂血(xue)(xue)(xue)(xue)。如(ru)果血(xue)(xue)(xue)(xue)清(qing)中大量顆粒，檢測(ce)前先離心或過濾(lv)。不要(yao)在37℃或更高的(de)溫度加熱解凍(dong)。應在室溫下解凍(dong)并確保樣(yang)品均(jun)勻地充分解凍(dong)。

操作步驟：

 1）使用前，將所有試劑充分混勻。不要(yao)使液體產(chan)(chan)生(sheng)大(da)量(liang)的(de)泡(pao)沫，以免加(jia)樣時加(jia)入大(da)量(liang)的(de)氣泡(pao)，產(chan)(chan)生(sheng)加(jia)樣上(shang)的(de)誤(wu)差。

2）根(gen)據待(dai)測樣(yang)(yang)品數量加上標準(zhun)品的(de)(de)(de)數量決定(ding)所需的(de)(de)(de)板條(tiao)數。每個(ge)標準(zhun)品和空白孔建(jian)議做(zuo)復(fu)孔。每個(ge)樣(yang)(yang)品根(gen)據自(zi)己的(de)(de)(de)數量來(lai)定(ding)，能使用復(fu)孔的(de)(de)(de)盡量做(zuo)復(fu)孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加(jia)入(ru)50ul于(yu)反應(ying)孔(kong)內。

3）加入稀釋好(hao)后的標(biao)準品50ul于反應孔、加入待(dai)測樣品(pin)50ul于反(fan)應孔內。立即加(jia)入(ru)50ul的(de)生物素標記的(de)抗(kang)體(ti)。蓋上膜板，輕輕振蕩混(hun)勻，37℃溫育1小時。

4）甩(shuai)去(qu)孔內液體，每孔加滿洗滌(di)液，振蕩30秒(miao)，甩去(qu)洗(xi)滌液，用(yong)吸水(shui)紙拍干(gan)。重復此(ci)操作3次。如果用洗板(ban)機(ji)洗滌(di)，洗滌(di)次數增加一次。

5）每孔加入80ul的(de)親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩(dang)混勻，37℃溫育30分(fen)鐘。

6）甩(shuai)去孔內液體(ti)，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩(shuai)去洗滌液，用吸(xi)水紙拍(pai)干。重復此操作(zuo)3次(ci)。如果用洗板機洗滌，洗滌次(ci)數增加一次(ci)。

7）每(mei)孔加(jia)入底物A、B各50ul，輕(qing)輕(qing)振蕩(dang)混勻，37℃溫育(yu)10分鐘(zhong)。避免光照。

8）取出酶(mei)標板，迅(xun)速加入50ul終(zhong)止(zhi)液，加入終(zhong)止(zhi)液后應立(li)即測定結果。

9）在450nm波長處測定(ding)各孔(kong)的OD值。

儲存日期有多久？

對于我們購買回來的(de)Elisa試劑盒儲存(cun)(cun)及(ji)期(qi)(qi)，相信(xin)大家都(dou)是(shi)根據(ju)盒子上的(de)(de)日期(qi)(qi)決定(ding)它(ta)的(de)(de)期(qi)(qi)的(de)(de)，但是(shi)如果我們實驗開封過的(de)(de)試劑盒，怎么確定(ding)它(ta)有多(duo)(duo)久的(de)(de)期(qi)(qi)呢？這點可(ke)能很多(duo)(duo)人不(bu)知(zhi)道該如何保存(cun)(cun)。不(bu)用(yong)擔心，我司(si)為(wei)您詳細解析關于Elisa試劑盒的儲存于(yu)期多久。

根據我司規定未開封的試劑盒：所有(you)試劑均按試劑瓶(ping)標(biao)簽(qian)上所示保(bao)存。請注意，收(shou)到試劑盒后(hou)請盡快將標(biao)準品、檢(jian)測溶液A、檢測溶液(ye)B以及96孔板保存(cun)于-20℃。

老師(shi)們再使用后的試劑(ji)盒：剩余試劑(ji)仍需按照試劑(ji)瓶卷標所示的溫度(du)保存，開封后的酶標板要加干燥劑(ji)后密封保存于(yu)-20℃，避免潮(chao)濕。

溫馨提示：試劑(ji)盒內酶標條可拆(chai)卸(xie)，按實驗需求可分(fen)多次使用;使用(yong)后的(de)剩余(yu)試劑(ji)盒建議在實驗后1個月內使用完(wan)畢。產品過期時間(jian)以(yi)盒(he)子上的(de)標(biao)簽為準，保質期內所有組分都確(que)保是(shi)穩定的(de)。

裸鼠環加氧酶2試劑盒注意事項(xiang)

1．試劑盒從(cong)冷藏環境中(zhong)取出應(ying)在室(shi)溫平衡(heng)15-30分鐘后(hou)(hou)方可(ke)使用，酶(mei)標包被(bei)板開封(feng)后(hou)(hou)如未用完，板條應裝入密封(feng)袋中(zhong)保存。

2．濃洗(xi)滌(di)液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶(rong)，洗(xi)滌(di)時不影(ying)響結果。

3．各步加樣(yang)均應(ying)使用加樣(yang)器，并經常(chang)校(xiao)對其(qi)性，以避免試驗誤差。一(yi)次加樣(yang)時間控制在5分鐘(zhong)內(nei)，如標本數量(liang)多，推薦使用排槍加樣(yang)。

4． 請(qing)每次測(ce)定的(de)同時做(zuo)標(biao)準曲線，做(zuo)復孔。如(ru)標(biao)本中待測(ce)物質含量(liang)過高（樣本OD值大于標準品孔(kong)孔(kong)的OD值），請先用樣(yang)品稀釋(shi)液稀釋(shi)一定倍(bei)數（n倍）后再測定，計算(suan)時請乘以總(zong)稀釋倍數（×n×5）。

5． 封板膜只限一次性使用(yong)，以避(bi)免交叉污染。

6．底(di)物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作(zuo)進行，試(shi)驗(yan)結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8．所有(you)樣(yang)品(pin)，洗(xi)滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．本試劑不(bu)(bu)同批號組(zu)分不(bu)(bu)得混用。

10. 如與英(ying)文說明書有異，以(yi)英(ying)文說明書為準。