Elisa試驗是一種敏(min)感性高，特異性強，重復(fu)性好的(de)實驗診斷方法(fa)。由于其試劑穩定、易保存，操作簡(jian)便，結(jie)果(guo)判斷較客觀等(deng)因素(su)，已廣泛應用(yong)在免疫學(xue)檢(jian)驗的(de)各領域(yu)中。依次(ci)加(jia)入標(biao)本、標(biao)準(zhun)品、HRP標(biao)記的(de)檢(jian)測(ce)抗體，經過溫育(yu)并徹(che)底(di)洗滌。用(yong)底(di)物TMB顯色，TMB在過氧(yang)化物酶的(de)催化下轉(zhuan)化成藍色，并在酸的(de)作用(yong)下轉(zhuan)化成*終的(de)黃色。用(yong)酶標(biao)儀在450nm 波長下測(ce)定吸光度（OD 值），計(ji)算(suan)樣品濃度。

BIM試劑盒,大鼠γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒樣品收集、處理及保存方法

1.  血清：使用(yong)不含熱原和內(nei)毒素的試管(guan)，操作過程中避免任何細胞(bao)刺激(ji)，收集血液后(hou)，3000轉離心10分(fen)鐘將血清和紅細胞(bao)迅(xun)速小(xiao)心地分(fen)離。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或(huo)其(qi)他(ta)抗凝。3000轉離心(xin)30分鐘取上(shang)清(qing)。

3.  細胞上清液：3000轉(zhuan)離(li)心(xin)10分(fen)鐘(zhong)去除顆粒和(he)聚合物。

4.  組(zu)織(zhi)勻(yun)漿(jiang)：將(jiang)組(zu)織(zhi)加(jia)入適(shi)量生理鹽(yan)水搗碎。3000轉離心(xin)10分鐘取(qu)上清。

5.  保(bao)存：如果樣本收集后不(bu)及時檢測，請按一次用量分裝，凍(dong)存于-20℃，避免反復凍(dong)融，在室溫下解(jie)凍(dong)并確保(bao)樣品均勻地(di)充分解(jie)凍(dong)。

自備物品

1.     酶標(biao)儀（450nm）

2.     高精度加樣器(qi)及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.     37℃恒溫箱(xiang)

注意事項
BIM試劑盒,大鼠γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒操作注意事項

1.  試劑盒保存在2-8℃，使(shi)用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取(qu)出(chu)的濃縮(suo)洗滌液會有(you)結(jie)晶，這(zhe)屬于正常現象(xiang)，水(shui)浴(yu)加熱(re)使(shi)結(jie)晶完全溶(rong)解后再(zai)使(shi)用。

2.  實(shi)驗中(zhong)不用的板條(tiao)應立(li)即放(fang)回自封(feng)袋中(zhong)，密封(feng)（低溫干燥(zao)）保存。

3.  標準品稀釋液即(ji)可視為陰性對照或者空白(bai)；預處理后的樣(yang)本無需(xu)稀釋，直接取10μL加樣(yang)即(ji)可。

4.  嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行(xing)溫育操作。

5.  所有(you)液體組分(fen)使(shi)用(yong)前充(chong)分(fen)搖勻(yun)。

試劑盒組成

注：標準(zhun)品用標準(zhun)品稀(xi)(xi)釋液依(yi)次(ci)稀(xi)(xi)釋為：80、40、20、10、5、2.5 pg/ml

試(shi)劑的準備

 20×洗滌(di)緩沖(chong)液(ye)的(de)稀(xi)釋：蒸餾水按1：20稀(xi)釋，即1份(fen)的(de)20×洗滌(di)緩沖(chong)液(ye)加19份(fen)的(de)蒸餾水。

洗板方法

1.  手(shou)工洗(xi)板：甩盡孔(kong)內(nei)(nei)液體，每(mei)孔(kong)加滿洗(xi)滌(di)液，靜(jing)置1min后甩盡孔(kong)內(nei)(nei)液體，在吸水紙上拍干，如此洗(xi)板5次。

2.  自動洗(xi)板機：每孔注(zhu)入洗(xi)液350μL，浸(jin)泡1min，洗(xi)板5次。

操作流程
BIM試劑盒,大鼠γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒操作步驟

1.  從室溫平(ping)衡20min后(hou)的鋁箔袋(dai)中取出所需板條(tiao)，剩(sheng)余板條(tiao)用(yong)自封(feng)袋(dai)密封(feng)放(fang)回4℃。

2.  設置標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)孔和樣本孔，標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)孔各加(jia)不同(tong)濃度的標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)50μL；

3.  待測樣(yang)本(ben)孔先加(jia)(jia)待測樣(yang)本(ben)10μL，再加(jia)(jia)樣(yang)本(ben)稀釋液40μL；

4.  隨后標準品孔和(he)樣本孔中每孔加入(ru)辣根過(guo)氧化物酶(mei)（HRP）標記的檢測抗體(ti)100μL，用封板膜(mo)封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去(qu)液(ye)體，吸水紙(zhi)上拍(pai)干，每孔加滿洗滌液(ye)，靜置(zhi)1min，甩(shuai)去(qu)洗滌液(ye)，吸水紙(zhi)上拍(pai)干，如此重復洗板(ban)5次（也可用洗板(ban)機(ji)洗板(ban)）。

6.  每(mei)孔加(jia)入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔(kong)(kong)加入終止(zhi)液50μL，15min內，在(zai)450nm波長處測定各孔(kong)(kong)的(de)OD值。

結果判斷

 繪制標準曲(qu)線(xian)：在(zai)Excel工作(zuo)表中，以標準品(pin)濃度作(zuo)橫坐標，對應OD值(zhi)作(zuo)縱坐標，繪制出標準品(pin)線(xian)性回歸曲(qu)線(xian)，按曲(qu)線(xian)方程計算各樣本(ben)濃度值(zhi)。

試劑盒性能(neng)

1.  準(zhun)確性(xing)：標準(zhun)品線性(xing)回歸與預期濃(nong)度相(xiang)關(guan)系(xi)數R值，大(da)于等于0.9900。

2.  靈敏(min)度(du)：檢測濃度(du)小于1.0pg/ml。

3.  特(te)異性：不(bu)與其它可溶性結構類似物交叉反應。

4.  重復性：板內、板間變異系數(shu)均小于15%。

5.  貯藏：2-8℃，避光防潮保存(cun)。

6.  有效期：6個(ge)月

BIM試劑盒,大鼠γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒免責聲明

1.   試劑盒(he)僅供研究使(shi)用，不得用于臨床實驗(yan)(yan)或人體實驗(yan)(yan)，否則所產(chan)生(sheng)的一(yi)切后(hou)果，由實驗(yan)(yan)者承擔，本公司概不負(fu)責。

2.   嚴格按照說明(ming)書(shu)操作(zuo)，實驗者(zhe)違反說明(ming)書(shu)操作(zuo)，后果(guo)由(you)實驗者(zhe)承擔。

更(geng)新時間：2023/11/8 9:21:30