【產品名稱】:大鼠抑制素結合蛋白試劑盒

【敏感(gan)性】： ＜5pg/ml

【特(te)異性(xing)】： 系統和其它細胞(bao)因子無交叉反應。

【保存】： -20℃ [短期內（如兩周）可4℃]

【有效期】： 12個月（-20℃）。

【用途】： 用于體外定量(liang)分析(xi)液體標本（通(tong)用型）。

標本收集:

1.血清：全血標本請(qing)于室(shi)溫放置2小時或4℃過夜后(hou)于1000×g離心20分鐘，取上(shang)清即可檢測，收集血液(ye)的(de)(de)試管應為一次(ci)性(xing)的(de)(de)無熱原(yuan)，無內毒素試管。

2.血漿：抗凝劑推薦(jian)使用(yong)EDTA，標(biao)本(ben)(ben)采(cai)集后30分鐘內于 1000×g離心15分鐘，取上(shang)清即可檢測。避(bi)免(mian)使用(yong)溶血，高(gao)血脂標(biao)本(ben)(ben)。

3. 其(qi)它生物(wu)標本：1000×g離心20分鐘，取(qu)上清(qing)即可(ke)檢測

4. 標(biao)本應清澈(che)透明，懸浮物應離心去除。

5.標本(ben)收集后若不及時檢(jian)測(ce)(ce)，請按(an)一次(ci)使用量分裝，凍存于-20℃/-80℃電冰箱內，避免反復凍融(rong)，1-6月(yue)內檢(jian)測(ce)(ce),4℃保(bao)存的應在(zai)1周內進行(xing)檢(jian)測(ce)(ce)。

6. 如果您的樣本中檢測物濃度高于標準品值，請根據實際情況，做適當倍數稀釋（建議先做預實驗，以確定稀釋倍數）。

試驗所需自備物品:

1.  酶標儀（450nm波長濾光片）

2.  高(gao)精(jing)度移(yi)液器，EP管及一次(ci)性吸頭：0.5-10μl, 2-20μl, 20-200μl, 200-1000μl

3.  37℃恒溫(wen)箱, 雙蒸水或去離子水

4.  吸水紙

檢測前準備工作:

1. 請(qing)提前20分鐘從冰(bing)箱中取出試劑盒，平(ping)衡至室(shi)溫(wen)。

2. 將濃(nong)縮洗滌(di)(di)液用(yong)(yong)(yong)雙蒸(zheng)水(shui)稀(xi)釋（1:25）。未用(yong)(yong)(yong)完(wan)的(de)放(fang)回(hui)4℃。從冰箱中取出的(de)濃(nong)縮洗滌(di)(di)液可能有結晶(jing)，屬于正常現象，可用(yong)(yong)(yong)40℃水(shui)浴(yu)微(wei)加(jia)熱使結晶(jing)完(wan)全(quan)溶解后再配(pei)制洗滌(di)(di)液。（加(jia)熱溫(wen)度(du)不要超過(guo)50℃）使用(yong)(yong)(yong)時洗滌(di)(di)液應為室(shi)溫(wen)。

3.  標(biao)準品(pin): 加入標(biao)準品(pin)&標(biao)本(ben)稀(xi)(xi)釋(shi)(shi)(shi)液1.0ml至凍干標(biao)準品(pin)中，靜置(zhi)10分(fen)鐘，待其(qi)(qi)充(chong)分(fen)溶解(jie)后(hou)，輕輕混勻（濃(nong)度為(wei)5000 pg/ml）。然后(hou)根據需(xu)要進(jin)行倍(bei)比(bi)稀(xi)(xi)釋(shi)(shi)(shi)（注：不要直接(jie)在板(ban)中進(jin)行倍(bei)比(bi)稀(xi)(xi)釋(shi)(shi)(shi)）。建議(yi)配(pei)制(zhi)成以(yi)下濃(nong)度： 2500、1250、625、312.5、156.2、78.1、39.05、0 pg/ml。樣(yang)品(pin)稀(xi)(xi)釋(shi)(shi)(shi)液直接(jie)作為(wei)空白孔(kong) 0 pg/ml。如配(pei)制(zhi)2500pg/ml標(biao)準品(pin)：取0.5ml （不要少(shao)于(yu)0.5ml ）5000pg/ml的(de)上(shang)述(shu)標(biao)準品(pin)加入含有0.5ml樣(yang)品(pin)稀(xi)(xi)釋(shi)(shi)(shi)液的(de)EP管中，混勻即可，其(qi)(qi)余濃(nong)度以(yi)此(ci)類推。

4. 生物素(su)化(hua)抗體(ti)工作(zuo)液：實(shi)(shi)(shi)驗(yan)前(qian)計(ji)算(suan)當次(ci)實(shi)(shi)(shi)驗(yan)所需(xu)用(yong)量（以100μl/孔計(ji)），實(shi)(shi)(shi)際配(pei)制時應(ying)多(duo)配(pei)制100-200μl。使(shi)用(yong)前(qian)15分鐘(zhong)，以生物素(su)化(hua)抗體(ti)稀釋液稀釋濃縮生物素(su)化(hua)抗體(ti)（1:100）成工作(zuo)濃度。當日使(shi)用(yong)。

5. 酶結合(he)物(wu)工作液(ye)：實(shi)(shi)驗(yan)前(qian)計算(suan)當(dang)次實(shi)(shi)驗(yan)所需用(yong)量（以(yi)100μl/孔計），實(shi)(shi)際配制(zhi)時應多配制(zhi)  100-200μl。使(shi)用(yong)前(qian)15分鐘，以(yi)生物(wu)素化(hua)抗體(ti)稀(xi)釋液(ye)稀(xi)釋濃縮生物(wu)素化(hua)抗體(ti)（1:100）成工作濃度。當(dang)日使(shi)用(yong)。

洗滌方法:

1. 自動(dong)洗板機(ji)：每(mei)孔加入洗滌液350μl，注(zhu)入與吸出間(jian)隔60秒。洗板5次(ci)。

2. 手工洗(xi)(xi)板(ban)(ban)：甩(shuai)盡孔內液(ye)體(ti)，在潔凈的吸(xi)水(shui)(shui)紙上拍干，每孔加(jia)洗(xi)(xi)滌液(ye)350μl，浸泡1-2分鐘(zhong)，吸(xi)去（不可觸及板(ban)(ban)壁）或甩(shuai)掉酶(mei)標板(ban)(ban)內的液(ye)體(ti)，在厚的吸(xi)水(shui)(shui)紙上拍干。洗(xi)(xi)板(ban)(ban)5次(ci)。

大鼠抑制素結合蛋白試劑盒操作步驟:

實驗開始(shi)前，各(ge)試劑(ji)均應平衡至(zhi)室(shi)溫；試劑(ji)或樣品配制時，均需充(chong)分混(hun)勻，并盡量(liang)避免起泡。

1、 加(jia)(jia)樣：分別設空(kong)白孔(kong)(kong)(kong)、標(biao)準(zhun)孔(kong)(kong)(kong)、待(dai)測(ce)樣品(pin)孔(kong)(kong)(kong)。空(kong)白孔(kong)(kong)(kong)加(jia)(jia)樣品(pin)稀釋液(ye)(ye)100μl，余孔(kong)(kong)(kong)分別加(jia)(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)或待(dai)測(ce)樣品(pin)100μl，注意不要有(you)氣泡，加(jia)(jia)樣時(shi)將樣品(pin)加(jia)(jia)于酶標(biao)板底(di)部，盡量不觸及(ji)孔(kong)(kong)(kong)壁，輕輕晃動混勻。給酶標(biao)板覆膜(mo)，37℃孵育2小(xiao)時(shi)。為保證實(shi)驗結(jie)果有(you)效性，每次實(shi)驗請使(shi)用新的(de)標(biao)準(zhun)品(pin)溶液(ye)(ye)。

2、 棄去(qu)液(ye)體，甩干(gan)，每個(ge)孔(kong)中加入Detection Ab工作液(ye) 100μl（在(zai)使用前15分(fen)鐘內配制），酶標(biao)板加上覆膜，37℃溫育1小時。

3、 棄去孔內液體(ti)(ti)，甩(shuai)干(gan)，洗(xi)板 3次，每次浸泡1-2分鐘，大約350μl /每孔，甩(shuai)干(gan)并在吸水紙上輕拍(pai)將孔內液體(ti)(ti)拍(pai)干(gan)。

4、 每(mei)孔加HRP Conjugate工作(zuo)液（臨用前15分鐘內(nei)配制）100μl，加上覆膜，37℃溫育1小時。

5、 棄去(qu)孔內液體，甩(shuai)干(gan)，洗板5次，方法同步驟3。

6、 每(mei)孔加(jia)底物溶(rong)液100μl，酶標板加(jia)上覆(fu)膜37℃避(bi)光孵(fu)育15分鐘(zhong)左右（根據實際顯(xian)色情況(kuang)酌情縮短或延長，但不(bu)可超過(guo)30分鐘(zhong)。當(dang)標準孔出現明顯(xian)梯度(du)時，即可終(zhong)止）。

7、 每(mei)孔加(jia)終(zhong)止液(ye)(ye)50μl，終(zhong)止反應，此時藍色立轉黃(huang)色。終(zhong)止液(ye)(ye)的加(jia)入(ru)順(shun)序應盡(jin)量與底(di)物液(ye)(ye)的加(jia)入(ru)順(shun)序相同(tong)。

8、 立即用酶標儀在450nm波長測量各孔的光密度（OD值(zhi)）。應提前打開酶標儀電源，預熱，設置好(hao)檢測程序。

9、 實驗(yan)完畢后將未用完的(de)試劑按規定的(de)保存溫度放回冰箱保存至(zhi)有效期(qi)結(jie)束。

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更新時(shi)間(jian)：2023/11/22 8:58:37