人白(bai)細(xi)胞(bao)介(jie)素6(IL-6)ELISA試劑盒的原理和操作方法
檢測原理：
本試劑(ji)盒(he)應用雙抗(kang)(kang)體(ti)夾心(xin)法測(ce)(ce)定標本中人(ren)白(bai)(bai)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)介(jie)(jie)素(su)6(IL-6)水平。用純化(hua)(hua)的人(ren)白(bai)(bai)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)介(jie)(jie)素(su)6(IL-6)抗(kang)(kang)體(ti)包被(bei)(bei)微孔板，制成固相(xiang)抗(kang)(kang)體(ti)，往包被(bei)(bei)單(dan)抗(kang)(kang)的微孔中依(yi)次加入人(ren)白(bai)(bai)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)介(jie)(jie)素(su)6(IL-6)，再與HRP標記的人(ren)白(bai)(bai)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)介(jie)(jie)素(su)6(IL-6)抗(kang)(kang)體(ti)結(jie)合，形成抗(kang)(kang)體(ti)-抗(kang)(kang)原-酶(mei)標抗(kang)(kang)體(ti)復合物，經過徹底洗(xi)滌(di)后加底物TMB顯色(se)。TMB在(zai)(zai)HRP酶(mei)的催化(hua)(hua)下轉化(hua)(hua)成藍(lan)色(se)，并在(zai)(zai)酸的作用下轉化(hua)(hua)成終(zhong)的黃(huang)色(se)。顏色(se)的深(shen)淺和樣品中的人(ren)白(bai)(bai)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)介(jie)(jie)素(su)6(IL-6)呈正相(xiang)關。用酶(mei)標儀在(zai)(zai)450nm波(bo)長下測(ce)(ce)定吸光度（OD值），通過標準曲線(xian)計算樣品中人(ren)白(bai)(bai)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)介(jie)(jie)素(su)6(IL-6)濃度。
操作步驟：
1.標準(zhun)品(pin)的稀釋(shi)：本試(shi)劑盒提供原倍標準(zhun)品(pin)一支，用戶可按(an)照下列圖表在小試(shi)管中進行稀釋(shi)。
2.加(jia)樣：分(fen)別設(she)空白(bai)孔(kong)（空白(bai)對照孔(kong)不(bu)加(jia)樣品(pin)及(ji)酶標試劑(ji)，其(qi)余各步操作相(xiang)同）、標準(zhun)(zhun)孔(kong)、待測樣品(pin)孔(kong)。在酶標包被(bei)板上標準(zhun)(zhun)品(pin)準(zhun)(zhun)確加(jia)樣50μl，待測樣品(pin)孔(kong)中先加(jia)樣品(pin)稀釋液40μl，然后再加(jia)待測樣品(pin)10μl（樣品(pin)終稀釋度為5倍）。加(jia)樣將(jiang)樣品(pin)加(jia)于酶標板孔(kong)底(di)部，盡量不(bu)觸及(ji)孔(kong)壁(bi)，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封(feng)板膜封(feng)板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液(ye)：將30倍濃(nong)縮(suo)洗滌液(ye)用蒸(zheng)餾水30倍稀(xi)釋后備用。
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去(qu)液體，甩干，每(mei)孔加(jia)滿洗滌液，靜置30后棄去(qu)，如此重復5次，拍干。
6.加酶(mei)(mei)：每孔加入酶(mei)(mei)標(biao)試劑50μl，空白孔除外(wai)。
7.溫育：用(yong)封(feng)板膜封(feng)板后置37℃溫育30分鐘(zhong)。
8.洗滌(di)：小心揭掉封板膜(mo)，棄(qi)去液(ye)體，甩干，每孔加(jia)滿洗滌(di)液(ye)，靜置30后棄(qi)去，如此(ci)重復5次，拍干。
9.顯色(se)(se)：每孔(kong)先加入顯色(se)(se)劑(ji)A50μl，再加入顯色(se)(se)劑(ji)B50μl，輕(qing)輕(qing)震蕩混(hun)勻，37℃避(bi)光顯色(se)(se)10-20分鐘(zhong)。
10.終止(zhi)：每孔加(jia)終止(zhi)液(ye)50μl，終止(zhi)反應（此(ci)時藍色立轉黃色）。
11.測定(ding)：以空白(bai)孔調零，450nm波長依序測量各孔的(de)吸光度（OD值）。測定(ding)應在(zai)加(jia)終止(zhi)液后15分鐘以內進行。
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