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什么是ELISA包被方式

閱讀次數：1719 發布時間：2019/8/21 8:57:12

將抗原或抗體固定在進程稱為包被（coating）。換言之，包被便是抗原或抗體結合到固相載體外表的進程。蛋白質與聚苯乙烯固相載體是經過物理吸附結合的，靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體外表的疏水基團間的效果于。

這種物理吸附對錯特異性的，受蛋白質的分子量、等電點、濃度等的影響。載體對不同蛋白質的吸附才能是不相同的，大分子蛋白質較小分子蛋白質一般含有更多的疏水基團，故更易吸附到固相載體外表。IgG對聚苯乙烯等固相具有較強的吸附力，其聯合多發生在Fc段上，抗體結合點露出于外，因而抗體的包被一般均選用直接吸附法。

蛋白質抗原大多也可選用與抗體類似的辦法包被。當抗原決定簇存在于或鄰近于疏水區域時，抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充沛露出，在這種情況下，直接包被效果欠安，能夠選用直接的捕獲包被法，即先將針對該抗原的特異抗體作預包被，其后經過抗原抗體反響使抗原固相化。此直接結合在固相上的抗原遠離載體外表，其抗原決定簇也得以充沛露出。

直接包被的抗原經固相抗體的親和層析效果，包被在固相上的抗原純度大大進步，因而含雜質較多的抗原也可選用捕獲包被法,試驗的特異性、敏感性均由此得以改進，重復性亦佳。直接包被的另一優點是抗原用量少，僅為直接包被的1/10乃至于/100。不易吸附在聚苯乙烯載體上的非蛋白質抗原可選用特別的包被辦法。例如，在檢測抗DNA抗體時，需用DNA作為包被抗原，而普遍的固相載體一般不能直接與核酸結合。可將聚苯乙烯板先經紫外線照耀（例如30W紫外燈，75cm照耀12小時），以添加其吸附性能。

固相載體先用堿性蛋白質，如聚賴氨酸、魚精蛋白等作預包被，也可進步核酸的結合力。也可用親和素生物素體系作直接包被，即用親和素先包被載體，然后參加生物素化的DNA，這種包被辦法均勻、牢固，已擴展應用于各種抗原物質的定量測定。

脂類物質無法與固相載體結合，可將其在有機溶劑（例如乙醇）中溶解后參加ELISA板孔中，開蓋置冰箱過夜或涼風吹干，待酒精蒸發后，讓脂質自然干固在固相外表。抗心磷脂抗體的ELISA試劑一般選用這種包被辦法。

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